獣医師生涯研修事業Q&A 産業動物編（日本獣医師会雑誌 第71巻（平成30年）第9号掲載）
ある診療所での過剰排卵処置，採卵並びに胚移植の作業手順［参考文献 1］を簡単に示している．
過剰排卵処置法として，黒毛和種の供胚牛に対して，①発情後 9～ 12 日に卵胞刺激ホルモン（FSH）24AU を漸減して筋肉内注射し，FSH 投与開始から 48 時間後にPGF2α類縁体製剤である Cloprostenol 0.5mg を筋肉内注射した．
AI は発情日もしくは発情翌日に実施した．②発情後 7 日に非外科手術的子宮還流法によって胚を採取した．国際胚移植学会（IETS）マニュアル第 3 版の胚品質評価に基づき，③胚の発育ステージでは桑実胚から脱出（孵化）胚盤胞の胚，並びに④品質コードではコード 1（Excellent または Good）もしくはコード 2（Fair）の胚を胚移植に供した．
胚の凍結保存法として，⑤胚の凍結保存液は，1.5Mエチレングリコールに 0.1M シュークロースを添加した20％子牛血清添加 m-PBS とした．凍結方法としてプログラム・フリーザーを用い，⑥植氷温度は －7℃，－0.3℃ / 分の速度で－30℃まで緩慢冷却後，液体窒素中に投入して凍結を完了した．
胚移植の受胚牛はホルスタイン種未経産牛で，スタンディング発情（day0）を示した牛の中で移植日（day7±1）の直腸検査で卵巣に 12mm 以上の充実した黄体が確認された牛とした．胚移植は移植器具を用い，⑦新鮮胚もしくは凍結胚を黄体側子宮角分岐部に 1 胚移植した．
質問 1：下線部①～⑦の作業内容で誤りがあるものをすべて選択し，番号で答えよ．
質問 2：：図 1 は採卵で採取された胚の写真の 1 例である．下表と図 1 をみて，A～E の胚の発育ステージコードと品質コードの組合せで誤りがあるものを A～E の中から 1 つ選択せよ．ちなみに，胚の品質コードは，1：Excellent または Good，2：Fair，3：Poor，4：Dead または Degenerating である．
解答と解説
質問 1 に対する解答と解説：
正解：③，⑦
③：胚の発育ステージにおいて，脱出（孵化）胚盤胞の記述は間違いである．商業ベースで透明帯から脱出した胚を移植することは，IETS の基準によると推奨されていない．胚の洗浄は完全な透明帯を保ち，透明帯に付着物がない胚のみ効果的な洗浄が可能である．発育ステージにかかわらず透明帯のない胚，透明帯に亀裂や欠損がある胚，透明帯の付着物が完全に除去できない胚は胚移植することは推奨されないし，国際的商取引は不可能である．これは，胚移植によって伝播される危険性のある伝染性疾病は，感染源が胚の細胞質中に存在する場合，胚の洗浄によって感染源を除去することはできないためである．
⑦：胚を黄体側子宮角分岐部には移植しない．通常，頸管経由法により黄体側の子宮角浅部（子宮角分岐部より 2～4cm）～子宮角深部（子宮角分岐部より 10～15cm）に移植する．最近は，柔らかいチューブで子宮角深部に注入できる移植器具も市販されており，子宮粘膜の損傷を招くことなく，深部に移植することが容易になっている（図 2）．
なお，担当獣医師や診療所により手技手法は異なると思われるが，①，②，④，⑤，⑥の記述に問題はない．
質問 2 に対する解答と解説：
正解：E
E 胚の発育ステージコードは 4（桑実胚），品質コードは 3（Poor）に該当する．形態的に初期桑実胚ではない．E 胚の中心部は正常な細胞が認められるものの，その辺縁部には，遊離した変性細胞が半分以上占めている．また，E 胚は細胞の大きさや色調などに異常がみられ，25～ 50％程度の細胞が正常と考えられるため，品質コードは 3 となる．商業ベースで活用されることはないが，まったく受胎しないというわけではない．
胚の発育ステージコードは図 3 に示すとおりである．コード 1：1 細胞，コード 2：2～ 16 細胞，コード 3：初期桑実胚，コード 4：桑実胚，コード 5：初期胚盤胞，コード 6：胚盤胞，コード 7：拡張胚盤胞，コード 8：脱出（孵化）胚盤胞，コード 9：拡張脱出（孵化）胚盤胞である．
胚の品質コードは，コード 1（Excellent またはGood）は，個々の細胞の大きさ，色及び集合性が一様であり，対称的で均整のとれた球形をなしている．発育ステージと矛盾がなく，変性細胞は少なく，85％以上の細胞は正常である．また，透明帯は明瞭で，凸凹やフラットな面が存在しない．コード 2（Fair）は，胚の細胞，大きさ，色，集合性，全体の形状に問題はなく，50％以上の細胞が正常である．コード 3（Poor）は，細胞の輪郭や大きさ，色と個々の細胞に異常が多く，25％以上の細胞が正常である．コード 4（Dead または Degenerating）は，変性した胚，卵子または 1 細胞期胚で，生存性は認められない．
参考文献
- ［1］ Takahashi M, Tsuchiya H, Hamano S, Inaba T,Kawate N, Tamada H : Improvement of superovulator y response and pregnancy rate after transfer of embr yos recovered from Japanese Blackcows fed r umen bypass polyunsaturated fattyacids, J Vet Med Sci, 75, 1485-1490 (2013)
- ［2］ Stringfellow DA and Seidel SM : The Manual ofthe Inter national Embr yo Transfer Society: AProcedural Guide and General Information forthe Use of Embr yo Transfer Technology, Emphasizing Sanitar y Procedures, 3rd ed., International Embr yo Transfer Society, Champaign (1998)
キーワード：牛、過剰排卵処置、採卵、胚移植、胚品質
